Нови комплет за детекцију нуклеинских киселина за коронавирус (САРС-Цов-2).
New Cороnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluрудеscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Pродуцt name 】Нови комплет за детекцију нуклеинске киселине (САРС-Цов-2) за нови коронавирус (метод флуоресцентне РТ-ПЦР сонде)
【Packaging specифиcations 】25 тестова/комплет
【Intended usстарости】
Овај комплет се користи за квалитативну детекцију нуклеинске киселине из новог коронавируса у брисевима назофаринкса, орофарингеалних (грла), предњих назалних брисева, брисева средњег носа, испирања носа и назалних аспирата од особа за које здравствени радник сумња да су заражени ЦОВИД-19. Детекција ОРФ1аб и Н гена новог коронавируса може се користити за помоћну дијагнозу и епидемиолошко праћење нове инфекције вирусом корона.
【Principles of the pроцеdure 】
Овај комплет је дизајниран за специфичне ТакМан сонде и специфичне прајмере дизајниране за ОРФ1аб и Н генске секвенце новог коронавируса (САРС-Цов-2). ПЦР реакциони раствор садржи 3 сета специфичних прајмера и флуоресцентних сонди за специфичну детекцију циљева, а додатни сет специфичних прајмера и флуоресцентних сонди се користи као интерна стандардна контрола комплета за детекцију ендогених гена за одржавање домаћинства.
Принцип теста је да се специфична флуоресцентна сонда разгради и разгради ексонуклеазном активношћу Так ензима у ПЦР реакцији, тако да се репортерска флуоресцентна група и угашена флуоресцентна група раздвоје, тако да систем за праћење флуоресценције може да прими флуоресцентну групу. сигнал, а затим Кроз ефекат обогаћивања ПЦР амплификације, сигнал флуоресценције сонде достиже постављену граничну вредност-Цт вредност (Цицле тхресхолд). У случају да нема циљног ампликона, репортерска група сонде је близу групе за гашење. У овом тренутку долази до преноса енергије флуоресцентне резонанције, а флуоресценција репортерске групе се гаси од стране групе за гашење, тако да флуоресцентни сигнал не може бити детектован флуоресцентним ПЦР инструментом.
Да би се пратила употреба реагенаса током теста, комплет је опремљен позитивним и негативним контролама: позитивна контрола садржи рекомбинантни плазмид циљног места, а негативна контрола је дестилована вода која се користи за праћење загађења животне средине. Препоручује се истовремено постављање позитивне контроле и негативне контроле приликом тестирања.
【Main comпоненts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Цомпоненти | |
Намe | Спецификација | Куантити | Куантити | |
Позитивна контрола | 180 μЛ/бочица | 1 | 1 | Вештачки конструисани плазмиди, дестилована вода |
Негативна контрола | 180 μЛ/бочица | 1 | 1 | Дестилована вода |
САРС-Цов-2 микс | 358,5 μЛ/бочици | 1 | / | Специфични парови прајмера, флуоресцентне сонде за специфичну детекцију, дНТП, МгЦл2, КЦл, Трис-Хцл, дестилована вода, итд |
Ензимска мешавина | 16,5 μЛ/бочици | 1 | / | Так ензими, реверзна транскриптаза, УНГ ензими, итд. |
САРС-Цов-2 мешавина (лиофилизована) | 25 тестова/бочица | / | 1 | Специфични парови прајмера, флуоресцентне сонде за специфичну детекцију, дНТП, Так ензими, реверзна транскриптаза, дестилована вода, итд. |
2к Буффер | 375 μЛ/бочица | / | 1 | МгЦл2, КЦл, Трис-Хцл, дестилована вода итд. |
Напомена:(1) Компоненте у различитим серијама се не могу мешати или замењивати.
(2) Припремите сопствени реагенс: комплет за екстракцију нуклеинске киселине.
【Storage condитиons и expiration date 】
For BST-SARS-25:Транспортујте и чувајте на -20±5℃ дуго времена.
For BST-SARS-DR-25:Транспорт на собној температури. Чувати на -20±5℃ дуго времена.
Избегавајте поновљене циклусе замрзавања-одмрзавања. Рок важења је оквирно одређен на 12 месеци.
Погледајте етикету за датум производње и употребе.
Након првог отварања, реагенс се може чувати на -20±5 ° Ц не више од 1 месец или до краја периода реагенса, који год датум наступи први, да би се избегли поновљени циклуси замрзавања-одмрзавања и број замрзавања реагенса -циклуси одмрзавања не би требало да прелазе 6 пута.
【Applicable instrument】АБИ 7500, СЛАН-96П, Роцхе-ЛигхтЦицлер-480.
【Sample requirements 】
1. Применљив тип узорка: Екстраховани раствор нуклеинске киселине.
2. Чување и транспорт узорака: Чувати на -20±5℃ 6 месеци. Замрзнути и одмрзнути узорке не више од 6 пута.
【Tестing metход】
1.Nucleic acid extraction
Изаберите одговарајући комплет за екстракцију нуклеинске киселине за екстракцију вирусне нуклеинске киселине и пратите упутства за одговарајући комплет. Препоручује се употреба комплета за екстракцију и пречишћавање нуклеинске киселине који производи Иикин Био-Тецх (Гуангзхоу) Цо., Лтд. или еквивалентни комплет за пречишћавање нуклеинске киселине.
2. Rеацtion реагеnt prepараtion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Уклоните мешавину САРС-Цов-2 и мешавину ензима, потпуно истопите на собној температури, темељно промешајте помоћу Вортек уређаја, а затим кратко центрифугирајте.
(2) 16,5 уЛ мешавине ензима је додато у 358,5 уЛ мешавине САРС-Цов-2 и добро промешано да би се добио мешани реакциони раствор.
(3) Припремите чисту ПЦР окталну епрувету од 0,2 мЛ и означите је са 15 уЛ горњег мешаног реакционог раствора по бунарчићу.
(4) Додајте 15 μЛ пречишћеног раствора нуклеинске киселине, позитивну контролу и негативну контролу и пажљиво покријте окталну капицу епрувете.
(5) Добро промешати окретањем наопачке и брзо центрифугирати да се течност концентрише на дну епрувете.
1
2.2 For BST-САРS-DR-25:
(1) Додајте 375ул 2к пуфера у САРС-Цов-2 мешавину ((лиофилизован) да бисте припремили реакциону мешавину. Темељно промешајте пипетирањем, а затим кратко центрифугирајте. (Када је реакциона смеша припремљена, препоручује се да се чува на -20℃ на дуготрајно складиштење.)
(2) Припремите чисту ПЦР окталну епрувету од 0,2 мЛ и означите је са 15 μЛ реакционе мешавине по бунарчићу.
(3) Додајте 15 μЛ пречишћеног раствора нуклеинске киселине, позитивну контролу и негативну контролу и пажљиво покријте поклопац окталне епрувете.
(4) Добро промешајте тако што ћете окренути наопачке и брзо центрифугирати да бисте концентрисали течност на дну епрувете.
3. ПЦР ampлифиcation (За подешавања рада погледајте упутство за инструмент.)
3. 1 Поставите ПЦР 8-епрувету у комору за узорке флуоресцентног ПЦР инструмента и поставите узорак за тестирање, позитивну контролу и негативну контролу према редоследу пуњења.
3.2 Канал за детекцију флуоресценције:
(1) Ген ОРФ1аб бира канал за детекцију ФАМ-а (Репортер: ФАМ, Куенцхер: Нема).
(2) Н ген бира канал за детекцију ВИЦ (Репортер: ВИЦ, Куенцхер: Нема).
(3) Интерни стандардни ген бира канал за детекцију ЦИ5 (Репортер: ЦИ5, Куенцхер: Нема).
(4) Пасивна референца је постављена на РОКС.
3.3 Подешавање параметара ПЦР програма:
Корак | температура (℃) | Време | Број циклуса | |
1 | Реакција реверзне транскрипције | 50 | 15 мин | 1 |
2 | Активација Так ензима | 95 | 2.5 мин | 1 |
3 | Активација Так ензима | 93 | 10 с | 43 |
Продужење жарења и аквизиција флуоресценције | 55 | 30 с |
Након подешавања, сачувајте датотеку и покрените реакциони програм..
4.Results analysis
Након завршетка програма, резултати се аутоматски чувају, а крива појачања се анализира. Крива појачања је подешена на подразумевани праг инструмента.
【Explanation of test resuлтс 】
1. Одредите валидност експеримента: ФАМ, ВИЦ канал позитивне контроле треба да има типичну криву појачања, а вредност Цт је генерално мања од 34, али може да варира због различитих подешавања прага различитих инструмената. Негативни контролни ФАМ, ВИЦ канал треба да буде без појачања Цт. Договорено је да горе наведени услови морају бити испуњени истовремено, у супротном овај тест је неважећи.
2. Резултат пресуде
ФАМ/ВИЦ канал | Резултат пресуде |
Цт<37 | Тест узорка је позитиван |
37≤Цт<40 | Крива амплификације је у облику слова С, а сумњиве узорке је потребно поново испитати; ако су резултати поновног испитивања конзистентни, оцењује се као позитиван, у супротном је негативан |
Цт≥40 или без појачања | Тест узорка је негативан (или испод доње границе детекције комплета) |
Напомена: (1) Ако су и ФАМ канал и ВИЦ канал позитивни истовремено, утврђује се да је САРС-Цов-2 позитиван.
(2) Ако је канал ФАМ или ВИЦ канал позитиван, а други канал негативан, тест треба поновити. Ако је истовремено позитиван, биће оцењен као САРС-Цов-2 позитиван, у супротном ће бити оцењен као САРС-Цов-2 негативан.